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高效液相色谱Pico-Tag法测定野蕨菜氨基酸成分

2019-12-26

   高效液相色谱(HPLC)Pico-Tag法因采用柱前衍生,反相色谱分离,具有分析时间短、灵敏度高、重现性好等优点,广泛地用于各种类型样品的氨基酸成分分析。

   野蕨菜具有独特的野味,无农yao污染,营养丰富,长期食用能延年益寿。因此广泛受到国内外人士的喜爱,尤其是东南亚各国朋友的喜爱。为此,我们HPLC Pico-Tag法对四川雅安地区野蕨菜氨基酸成分进行了测定,结果令人满意。

仪器准备

 

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

 

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

溶液配制:

A液  19.0g三水醋酸钠,0.5mL三乙胺溶解于1L超纯水中。用冰醋酸调pH为6.4,用0.45μm滤膜过滤,取此液940mL,加入60mL乙腈,混匀,超声波脱气20s(或充氮保存)

B液  分别量取600mL乙腈,400mL水,混匀,超声波脱气20s备用。

样品稀释液  取710mg Na2HPO4加超纯水至1000mL,用10%磷酸-乙腈(95:5)调pH为7.4备用。

样品水解液  1g苯酚溶解于6mol/LHCI100mL中

再干燥液  乙醇:水:三乙胺=2:2:1

衍生液  异硫氰酸苯(PITC):乙醇:三乙胺:水=1:7:1:1

实验方法:

取整株鲜蕨菜切碎,于105℃烘至恒重,用研钵磨细,精确称取100mg左右样品放入180mm×18mm试管中,加6mol/L HCI 10mL,巯基乙醇20μL,正辛醇二滴,混匀,用0.45μm滤膜过滤。取滤液20μL,放入6mm×50mm小管,装入水解台,在60-100mT下干燥20-30min,加15μL再干燥液,混匀,干燥20-30min。加20μL衍生液,混匀,室温下放置10min。干燥之后,加入100μL样品稀释液,混匀,即可进样分析。

谱条件:

色谱柱

Pico-Tag HAA-Column 3.9mmi.d×150mm

柱温

38℃

波长

254nm,0.1AUFS

 

谱图分析

 

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